FluorCamクローズドGFP/Chl.蛍光イメージングシステム

FluorCam閉鎖型GFP/Chl.蛍光イメージングシステムは、緑色蛍光タンパク質に応用される一連の分子及び細胞生物学的研究にサービスを提供することができる。閉鎖型蛍光イメージングシステムには、ソフトウェアによって完全に制御され、電気的に駆動されるフィルタホイールと、GFP、EGFP、wtGFP、YFP、BFPまたは他の帯域蛍光タンパク質と蛍光体を検出し、イメージングすることができる一連のフィルタセットが取り付けられている。

FluorCamクローズドGFP/Chl.蛍光イメージングシステムはまた、植物が葉緑素蛍光を発する動的変化と空間分布を検出し、Kautsky効果過程、蛍光クエンチ及びその他の瞬間蛍光過程（瞬間変化）を測定し、2次元蛍光画像を提供するために使用することができる。専用に設計されたハードウェア構成により、本システムは蛍光タンパク質、蛍光体イメージング、またはクロロフィル蛍光検出イメージングに自動的に変換することができる。このシステムは高度に統合されており、サンプルの暗適応を行うことができる。

応用分野：

・蛍光蛋白質と蛍光体の蛍光検出

・遺伝子移動とバイオセンサ技術

・遺伝子組み換え植物の研究

・異なる遺伝子型耐性スクリーニング

・植物―微生物相互作用の研究

・植物―原生動物の相互作用研究

・植物光合成特性と代謝障害スクリーニング

・生物的及び非生物的ストレスの検出

・植物のストレス耐性または感受性の研究

・気孔不均一性の研究

・代謝混乱研究

・長勢と生産量評価

機能の特徴：

・操作が簡便で、測定サンプルの高さを調整でき、専用暗適応箱を集積し、被測定植物の暗適応処理、操作などに便利である

・1392×1040ピクセルまでの高解像度CCD、クロロフィル蛍光とGFPを迅速かつ正確に捕捉する

・自動繰り返しイメージング測定を行うことができ、実験プログラム（Protocols）を設定して自動循環イメージング測定を行うことができ、イメージング測定データは自動的に時間と日付でコンピュータに保存される（タイムスタンプ付き）

・Kautsky誘導効果、蛍光急冷分析などの各種汎用実験プログラム（protocols）を持ち、測定分析パラメータは50以上に達する

・葉または植物形態測定分析用の最大撮像面積20×25 cmのTetraCamカラー撮像モジュールをオプションで配置可能

典型的なサンプル：

• 葉、茎、種、根、小植物全体

• カルス、シャーレの苗

• 果実と花

• 青バクテリア、緑藻、バクテリア

• トランスジェニック動物

技術パラメータ：

• 測定パラメータ：Fo, Fo’, Fs, Fm, Fm’, Fp, FtDn, FtLn, Fv, Fv'/ Fm'，Fv/ Fm ,Fv',Ft,ΦPSII,NPQ_Dn, NPQ_Ln, Qp_Dn, Qp_Ln, qN, qP，QY, QY_Ln,Rfd, ETRなど50以上の葉緑素蛍光パラメータがあり、各パラメータは2次元蛍光カラー画像を表示することができる

・自動測定プログラムの編集が自由な完全な自動測定プログラム（protocol）を備えている

a）Fv/Fm：測定パラメータはFo、Fm、Fv、QYなどを含む

b）Kautsky誘導効果：Fo、Fp、Fv、Ft _ Lss、QY、Rfdなどの蛍光パラメータ

c）蛍光クエンチ分析：Fo、Fm、Fp、Fs、Fv、QY、ΦII、NPQ、Qp、Rfd、qLなど50以上のパラメータ

d）光応答曲線LC：Fo、Fm、QY、QY _ Ln、ETRなどの蛍光パラメータ

e）PAR吸収とNDVI（オプション）

f）A再酸化動力学（オプション）

g）GFP等静的蛍光イメージング測定

h）OJIP高速蛍光動力学分析（オプション）：Mo（OJIP曲線初期傾斜）、OJIP固定面積、Sm（全光反応中心を閉じるために必要なエネルギーの測定）、QY、PIなど26パラメータ

§高解像度TOMI-2 CCDセンサ

a）プログレッシブ走査CCD

b）最高画像解像度：1360×1024画素

c）時間分解能：最高画像分解能で毎秒20フレームに達することができる

d）A/D変換解像度：16ビット（65536階調）

e）画素サイズ：6.45µm×6.45µm

f）運転モード：1）クロロフィル蛍光パラメータ測定用の動的ビデオモード、2）GFPなどの蛍光蛋白質と蛍光染料測定のためのスナップショットモード

g）通信モード：ギガビットイーサネット

• 光源プレート：4枚の大型高強度パッケージLED光源プレート、各光源プレートは8×9 LEDアレイからなり、光源プレートの有効面積はイメージング面積と同じ13×13 cmである

• 測定光：標準617 nm赤色光、その他のバンドは選択可能、持続時間は10µs-100µs調整可能

• 2色光化光：2赤色光（617 nm）＋2青色光（470 nm）、Actinic 1最大光強度300µmol（photons）/m².s、Actinic 2最大光強度2000µmol（photons）/m².s、最大光化学光は3000µmol（photons）/m².sにアップグレード可能

• 飽和光フラッシュ：最大光強度4000µmol（photons）/m².s、6000µmol（photons）/m².sにアップグレード可能

• イメージング面積：13×13 cm、植物葉、植物組織、藻類、コケ、地衣、植物全体または複数の植物、96孔板、384孔板などに対してイメージング分析を行うことができる

• GFP測定モジュール：GFP（緑色蛍光タンパク質）を測定するための7ビットフィルタ及び専用フィルタ

• PAR吸収測定モジュール（オプション）：遠赤色光740 nm（FAR）、660 nm 2色LED光源板及び専用フィルタ、PAR吸収及びNDVI測定用

• QAの酸化動力学イメージング分析（オプション）：STF蛍光動力学分析測定を行うことができ、単回転光フラッシュ（STF）光強度は120000µmol（photons）/m².s in 100µsに達する

• OJIP高速蛍光動力学モジュール（オプション）：時間分解能が1µsに達し、測定分析可能なOJIP曲線と二十数項の関連パラメータ：Fo、Fj、Fi、PまたはFm、Vj、Vi、Mo、Area、Fix Area、Sm、Ss、N（QA還元回転数）、Phi­­­Po、Psi _ o、Phi _ Eo、Phi _ Do、Phi _ pav、ABS/RC（単位反応中心の吸収光量子フラックス）、TRo/RC（単位反応中心の初期捕獲光量子フラックス）、ETo/RC（単位反応中心の初期電子伝達光量子フラックス）、DIo/RC（単位反応中心のエネルギー散逸）、ABS/CS（単位試料断面の吸収光量子フラックス）、TRo/CSo、RC/CSx（反応中心密度）、PIABS（吸収光量子フラックスに基づく「性能」指数または生存指数）、PIcs（断面に基づく「性能」指数または生存指数）

• 紫外LED光源板（オプション）：365 nmまたは385 nm、1）多色蛍光を測定する（詳しくはFluorCamマルチスペクトル蛍光イメージングシステムを参照）、2）wtGFP（野生型緑色蛍光蛋白質）、DAPI（4′、6−ジアミノ−2−フェニルインドール、蛍光染料）の測定

• 青色LED光源板（オプション）：470 nm、1）EGFP（強化型緑色蛍光タンパク質）の測定、2）気孔機能研究用

• 緑色LED光源プレート（オプション）：530 nm、測定YFP（黄色蛍光蛋白）

*wtGFP、DAPI、EGFP、YFPなどの蛍光タンパク質または蛍光染料を測定するには、対応するフィルタを選択する必要もあります

• FluorCam葉緑素蛍光イメージング解析ソフトウェア機能：Live（ライブテスト）、Protocols（実験プログラム選択カスタマイズ）、Pre-processing（イメージング前処理）、Result（イメージング解析結果）などの機能メニュー

• 顧客カスタマイズ実験プログラムプロトコル（protocols）：時間（例えば測定光持続時間、光化学光持続時間、測定時間など）、光強度（例えば異なる光質光化学光強度、飽和光強度、変調測定光など）を設定でき、専用実験プログラム言語とスクリプトを備え、ユーザーもProtocolメニュー中のガイドプログラムテンプレートを利用して新しい実験プログラムを自由に作成することができる

• 自動測定分析機能：自動無人循環イメージング測定、繰り返し回数及び間隔時間の顧客カスタマイズ、イメージング測定データの自動日付保存コンピュータ（タイムスタンプ付き）を設定することができる実験プログラム（Protocol）

  スナップショット（snapshot）モード：スナップショットイメージングモードにより、光強度、シャッター時間及び感度を自由に調整して、はっきりと際立った植物サンプルの定常蛍光と瞬時蛍光画像を得ることができる

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• イメージング前処理：プログラムソフトウェアは、複数の植物サンプルまたは複数の領域を自動的に識別したり、手動で領域を選択したりすることができます（Region of interest、ROI）。手動選択範囲のシェイプは、正方形、円形、任意の多角形、または扇形にすることができます。ソフトウェアは各サンプルと選択された領域の蛍光動力学曲線と対応するパラメータを自動的に測定分析することができ、サンプルまたは領域の数は制限されない（>1000）

• データ分析モード：「信号計算再平均」モード（算術平均値）と「信号平均再計算」モードを備え、高信号対雑音比の場合は「信号計算再平均」モードを選択し、低信号対雑音比の場合は「信号平均再計算」モードを選択して雑音による誤差をフィルタリングする

• 出力結果：高時間解像度蛍光動態図、蛍光動態変化ビデオ、蛍光パラメータExcelファイル、ヒストグラム、異なるパラメータイメージング図、異なるROIの蛍光パラメータリストなど

• CCD検出器帯域幅：400〜1000 nm

・給光制度：静的または動的（洞式）

・スペクトル応答：540 nmで量子効率が最高（70%）、400 nmと650 nmで50%減少

・読み出しノイズ：12 eRMS未満、典型的な10 e

・フルウェル容量：70000 eより大きい（unbinned）

・Bios：ファームウェアはアップグレード可能

・通信方式：ギガビットイーサネット

・サイズ：471 mm（W）×473 mm（D）×512 mm（H）

・重量：Appr.40 kg

・電源入力：Appr.1100 W

・給電電圧：90～240 V

一般的な用途：

上海生命科学研究院がFluorCam測定を用いて得たGFPイメージング図では、明るい色を発する株はGFPを発現する株であり、その色が赤色に偏るほど、発現するGFPが多いことを示している

ボタンサンゴ虫の収縮−膨張の異なる時相（T 1＝0分、T 2＝30分、T 3＝60分）NDVIとGFPイメージング分析（Miguel、2014）

産地：ヨーロッパ